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关于泰乐菌素

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美洲幼虫腐臭病,简称美幼病,英文缩写AFB,是一种蜜蜂传染性疾病,由类幼虫芽孢杆菌(最初定名为幼虫芽孢杆菌)引起,这种病菌属革兰氏阳性的产芽孢厌氧菌。感染此病的蜜蜂个体在幼虫和蛹阶段,先变黄,再变黑直至腐烂,产生大量粘性物质残留在蜂巢内壁上,造成污染。美幼病是为数不多的能够毁灭整群蜂的严重病害之一,加之病原菌孢子寿命长,预防和控制美幼病非常困难。从20世纪50年代开始,在美国防治这种病害的唯一方法是使用一种叫“土霉素”的抗生素(简称OTC,一种四环素类抗生素),当时这种药品的商品名为“土霉素”。土霉素在溶液中很容易分解,因此有人认为这种药可能不会污染蜂蜜。

最近,美国的很多蜂农发现用土霉素防治美幼病的效果越来越差。Miyagi等研究证明,从患有美幼病的幼虫体内提取的类芽抱杆菌的幼虫出现了抗土霉素的变种,试验所用子脾是1998年从明尼苏达州的蜂群抽取的,土霉素对抽样蜂群的治疗效果很差。

为了应对不断发生的类芽抱杆菌药物抗性事件,多年来美国农业部已经对可选用的抗生素进行仔细筛选。1970年,泰乐菌素首次被报道作为治疗美幼病的候选药物。Moffett等发现在蔗糖糖浆中掺入少量泰乐菌素饲喂感染美幼病的蜂群,32天内患病蜂群康复,对感病蜂群进行l周2次的治疗(共进行12次),到次年7月所试蜂群未复发。用乳酸泰乐菌素治疗患病蜂群,可采用两种饲喂方法:加入糖水中饲喂蜂群和加在炼糖饲喂。采用上述方法对感病蜂群每周治疗1次,至少3周,大部分美幼病群得到控制。总体来说,直接饲喂要比喷洒效果更好。对于患病严重的蜂群康复之后,应再坚持使用,按每群1 g乳酸泰乐菌素的剂量至少使用3周(每周1次)。按照以上剂量治疗患病蜂群,25群只有2群在秋季再次出现轻微感染,可能是由于治疗时间少于3周的缘故。Hitchcock 等又进行补充试验,对患病蜂群施以更小剂量的酒石酸泰乐菌素,即治疗一次所用的泰乐菌素量为每群0.25 g或0.1 g,缩短治疗间隔时间,大约每3天1次,大约7周,结果对美幼病的疗效达到100%。

泰乐菌素对成年蜂无毒副作用,对蜜蜂幼虫的毒性也小于土霉素。通过在实验室中对未成年工蜂进行药效试验,证实蜜蜂幼虫耐药性很大,所能忍耐食物中抗生素的剂量为0.005%~0.04%。实验室研究表明食物中掺人的孢子达到一个非正常量(每毫升含1.5×108个孢子),中度剂量的泰乐菌素就可以防止蜜蜂小幼虫感染类芽孢杆菌。在治疗过程中增加抗生素的剂量,虽然对幼虫和蛹的发育影响不大,但不能达到致死浓度(>0.05%)。炼糖中泰乐菌素更易被采集蜂取食,最高可达800 mg/7g 糖。当分别用20 mg,100 mg,200 mg,400 mg和800 mg的浓度进行试验时,未发现对蜂群产生负面影响,其中一定剂量范围的泰乐菌素对美幼病的治疗效果与标准剂量的四环素(200 mg)相当。200 mg的四环素或100 mg的泰乐菌素均能预防美幼病,最长达3周,而200 mg的泰乐菌素则可达到4周。100 mg以上剂量的泰乐菌素完全可以治疗感染美幼病的蜂群。野外实验结果得出,每群蜂饲喂200 mg泰乐菌素可以预防蜂群感染美幼病达4周之久,再次饲喂同样剂量的泰乐菌素可预防美幼病的时间更长,并且受蜂群和季节因素的影响,泰乐菌素有效控制时间要比四环素长33%。

泰乐菌素可以有效的控制AFB病菌对土霉素的抗性问题,而不会引起成年蜂和幼虫的死亡。Elzen等发现在美幼病的最初治疗阶段,每周饲喂1次20 g精制细砂糖中添加200 mg泰乐菌素(最佳比例)剂量,饲喂3周,45天内蜂群的症状明显减轻,治愈后蜂群6个月未发现再次感染。而且用多种高剂量的泰乐菌素(20 g精制细砂糖中添加600 mg或1000 mg泰乐菌素)持续饲喂蜂群3个繁殖周期,与对照组相比没有出现死亡率明显升高的现象。试验采用另一种治疗方法进行验证,即利用混有泰乐菌素的炼糖拌人植物油制成小饼饲喂,泰乐菌素的剂量与前种方法相同,这种方法同样可以有效地控制美幼病的症状,但是蜂巢小甲虫(Aethina tumida MuDay)的数量明显增加。由于蜂巢小甲虫对蜂群具有破坏性,这种方法没有得到权威机构的认可。所以还是在白砂糖中直接添加泰乐菌素的方法更为可取。

A1ippi 等对采自不同地区的67个类芽抱杆菌样品进行泰乐菌素的敏感性测定,确定了它们的最小抑菌浓度(MIC,在培养状态下,抗生素能够抑制细菌生长的最低浓度)。MIC值范围是0.0078~0.5 μg/mL,这是所有AFB病原菌的分离菌均不能对泰乐菌素产生抗性的最低值。

补充试验对100 mg和200 mg剂量的泰乐菌素进行了评价,证实泰乐菌素实际用量与糖的最适比例。将泰乐菌素加入到20g精制细砂糖中,每隔7天饲喂蜂群1次,共饲喂3次。结果发现,经过45天,200 mg剂量组控制了抗性,而l00 mg剂量组未完全控制抗性。100 mg剂量组的10群蜂中有1群出现症状。所以,200 mg泰乐菌素每隔7天饲喂1次,共饲喂3次为最适剂量。

Kockansky 等对溶解于蔗糖糖浆中的泰乐菌素和土霉素的稳定性进行了比较,发现在34℃黑暗条件下,溶于高纯蔗糖糖浆中的土霉素的半衰期为7天(半衰期为物质降解50%所用的时间);而泰乐菌素的稳定性明显较高,其半衰期为186天。泰乐菌素复合物(泰乐菌素和其降解产物混在一起)的半衰期则更长,达到287天。溶于商品化蔗糖糖浆中的抗生素相对较低,土霉素的半衰期为6.3天,泰乐菌素的半衰期为75天。这些抗生素溶于高纯化和商品化的蔗糖糖浆中所表现出来的稳定性差异可能是金属离子污染的缘故,例如铁和铜离子可以显著催化生物材料发生氧化反应。   

泰乐菌素和蜂蜜混合经长时间放置后,测定其中泰乐菌素残留物的稳定性。利用液体层析法分析,从稀释的蜂蜜中提取残留物。发现泰乐菌素经长时间放置之后转化为脱碳酶糖泰乐菌素(desmycosin),其半衰期在34℃时大约4个月。   

蜂蜜中的脱碳酶糖泰乐菌素似乎更加稳定,并且这两种抗生素的总量在9个月后并未明显减少。因此,利用泰乐菌素治疗美幼病时要谨慎,以免其残留物持续污染蜂蜜。

AFB病原菌对土霉素的抗性不断发生,说明大量使用抗生素会降低其使用周期,在使用泰乐菌素过程中也应考虑以上情况。多年来,特拉霉素作为一种预防美洲幼虫腐臭病的药物,而不是作为治疗性的药物。

2005年10月在美国,泰乐菌素(实际上为酒石酸泰乐菌素)被推荐用于预防蜂群美洲幼虫病,但它还不能作为一种治疗性的方法。其主要的使用方法如下:将200 mg酒石酸泰乐菌素混入20 g糖粉中,立即撒在于脾上部边框上缘,每周治疗1次,连续3周。   

彭文君 译自《蜜蜂集锦》2008年第11期   

《中国蜂业》2009,59(3)

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